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Grundlagen  Gaschromatographie 
Gaschromatographie

Die Standardmedien für den Nachweis von akkumulierten Fettsäuren in der Gaschromatographie sind die Pepton-Hefeextrakt-(PYG) und die Chopped-Meat-Carbohydrate-(CMC)-Bouillon. Da die Fettsäuren in der Bouillon erst angereichert werden müssen, sollte die Bebrütungszeit dem Wachstum der zu identifizierenden Stämme angepasst werden. Bei Prevotella-Arten beträgt sie etwa eine Woche.

  • Für den Nachweis flüchtiger Fettsäuren werden 0,4g NaCl, 0,2ml 50%ige H2SO4, 1ml Kulturmaterial (CMC, PYG) oder Standart und 1ml Ether in ein Schraubverschlußröhrchen gegeben, verschlossen und ca. 20mal über Kopf geschüttelt, bis eine Emulsion entstanden ist. Anschließend wird ca. 1 Minute bei geringer Umdrehungszahl zentrifugiert. Die Etherphase (oben) wird abpipettiert und in den Gaschromatograph eingespritzt. Die Proben werden bis zur Verwendung im Gefrierschrank aufbewahrt.

  • Zum Nachweis kurzkettiger, nichtflüchtiger Fettsäuren werden 1ml Kulturmaterial oder Standart mit 2ml Methanol und 0,4ml H2SO4 versetzt und 30 Minuten zur Veresterung bei 60°C in einem Wasserbad inkubiert. Anschließend werden 1ml Aqua dest. und 1ml Chloroform zugegeben. Wiederum wird ca. 20mal über Kopf geschüttelt, bis eine Emulsion entstanden ist und anschließend ca. 1 Minute bei geringer Umdrehungszahl zentrifugiert. Die Chloroformphase (unten) wird abpipettiert und in den Gaschromatograph injiziert.

Copyright by L.T. Zabel, 2005