Gaschromatographie
Die Standardmedien für den Nachweis von akkumulierten Fettsäuren in der Gaschromatographie sind die Pepton-Hefeextrakt-(PYG) und die Chopped-Meat-Carbohydrate-(CMC)-Bouillon. Da die Fettsäuren in der Bouillon erst angereichert werden müssen, sollte die Bebrütungszeit dem Wachstum der zu identifizierenden Stämme angepasst werden. Bei Prevotella-Arten beträgt sie etwa eine Woche. Für den Nachweis flüchtiger Fettsäuren werden 0,4g NaCl, 0,2ml 50%ige H2SO4, 1ml Kulturmaterial (CMC, PYG) oder Standart und 1ml Ether in ein Schraubverschlußröhrchen gegeben, verschlossen und ca. 20mal über Kopf geschüttelt, bis eine Emulsion entstanden ist. Anschließend wird ca. 1 Minute bei geringer Umdrehungszahl zentrifugiert. Die Etherphase (oben) wird abpipettiert und in den Gaschromatograph eingespritzt. Die Proben werden bis zur Verwendung im Gefrierschrank aufbewahrt. Zum Nachweis kurzkettiger, nichtflüchtiger Fettsäuren werden 1ml Kulturmaterial oder Standart mit 2ml Methanol und 0,4ml H2SO4 versetzt und 30 Minuten zur Veresterung bei 60°C in einem Wasserbad inkubiert. Anschließend werden 1ml Aqua dest. und 1ml Chloroform zugegeben. Wiederum wird ca. 20mal über Kopf geschüttelt, bis eine Emulsion entstanden ist und anschließend ca. 1 Minute bei geringer Umdrehungszahl zentrifugiert. Die Chloroformphase (unten) wird abpipettiert und in den Gaschromatograph injiziert.
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